组织四环素检测试剂盒（10ppb）Tissue TetraSensor kit（10 ppb）
试剂盒型号：KIT036 温育温度：室温（25℃± 5°C）
简介：
Tetrasensor试剂盒是一种利用竞争性受体-配体免疫技术，快速检测动物、食品及饲料样品中四环素族抗生素残留的试剂盒。该方法可检测四环素族分子（四环素、土霉素、强力霉素、氯四环素）并达到很高的灵敏度。检测下限为10 ppb。
此试剂盒可以检测动物（牛肉、猪肉、鸡肉等）组织类样品包括肌肉、肝脏、肾脏中的四环素残留，也可对水产品、鱼类、尿样和饲料中的四环素残留进行检测。
若检测符合MRL（最大残留限量）要求的样品或蛋类样品，推荐使用KIT013。
若要求动物组织样品中四环素族检测灵敏度达到20ppb，推荐使用KIT011。
操作要点：
1生鲜组织：
l 向均质袋中加入10g组织样品和30 ml稀释后的“缓冲液1”
l 均质2分钟
l 吸取1ml均质液并离心1分钟
l 向试剂微孔中加入200μl上清液
l 将测试条插入试剂微孔中
l 室温下反应10分钟
l 去掉测试条下端吸水海绵目测结果或使用Readsensor判读结果
2加工后的肉类：
l 向均质袋中加入10g组织样品和30ml稀释后的“缓冲液1”
l 均质2分钟
l 吸取1ml均质液并离心1分钟
l 向400μl上清中加入200μl“缓冲液2”，混合均匀
l 向试剂微孔中加入200μl与“缓冲液2”混合均匀后的上清液
l 将测试条插入试剂微孔中
l 室温下反应10分钟
l 去掉测试条下端吸水海绵目测结果或使用Readsensor判读结果
反应机理：
Tetrasensor试剂盒是利用活性受体对样品中四环素族分子特异性识别原理竞争性检测样品中是否含有四环素残留。检测需要两部分，一部分为一定数量的被标记的受体；另一部分为测试条，包被有两条呈绿色的俘获线。当组织样品上清液与标记有受体的试剂混合，受体与样品中的四环素分子结合；插入测试条，样品溶液会沿着测试条垂直向上渗透并通过测试条上的捕获区域。当样品溶液经过绿色的俘获线时，会显现红色。其中，第一条俘获线(检测线，TEST)将捕获未结合四环素的受体，第二条俘获线将捕获未被第一俘获线所俘获的剩余的受体。这条在上方的第二条俘获线又被称为控制线（CTRL），应当在每次结果中被观测到。当样品中含有达到检测灵敏度浓度的四环素类抗生素时，则检测线的颜色比控制线的颜色浅；相反，如果样品中没有四环素类抗生素时，则检测线的颜色比控制线的颜色深。
试剂盒组分：
每个试剂盒所含试剂可供96次检测。
l 每盒12筒，每筒含8个装有冻干试剂的微孔和8个测试条
l 1瓶175ml的20倍浓缩的“组织缓冲液”，20倍稀释后作为“缓冲液1”使用
l 1瓶175ml的1倍浓缩的“尿样缓冲液”即“缓冲液2”，可以直接使用
l 1把200μl的微量移液器和配套吸头
l 1个白色微孔框板
l 1份说明书
组织样品制备所需的材料及仪器：
l 2ml离心管（Eppendorf或其他品牌）
l 蒸馏水（去离子水）
l 天平，量程3-10g
l 均质器或匀浆机
l 用于均质的均质袋
l 均质袋支架
l 迷你离心机
l 定时器
l Readsensor（选配）
l 灭菌吸头
注意事项：
1. 本试剂盒在4℃（±2℃）保存。在使用前应先平衡至室温，避免吸潮。检测完毕，余下的测试条放回试剂筒并盖紧筒盖，放回试剂盒中，2-8℃保存。
2. 检测的最佳温度为25℃±3℃。
3. 插条室温反应10分钟后，立即读取结果。如果不能立即读取结果，去掉测试条下端吸水海绵，注意不要接触或损坏测试条中部检测区域，并在5分钟内读取结果。
4. 若使用仪器（Readsensor）读取结果，请在检测前打开仪器。
5. 测试条干燥后颜色强度会增加。
6. 如发现阳性，检测结果需要进行确证。
7. 使用试剂时，用完一筒再打开另外一筒，以免受潮失效。
标准操作步骤：
可用批量检测，也可用于单一测试。在操作过程中，混合试剂和奶样、插入或取出测试条等步骤要尽量避免时间延误。请保证检测样品温育时间和温度的一致性。一次检测样品数量不能超过8个。
样品前处理步骤（生鲜组织适用）
1. 从冰箱中取出试剂盒，恢复至室温。
2. 将“组织缓冲液”稀释20倍。可以取50ml“组织缓冲液”，加蒸馏水定容至1L。1L“缓冲液1”至少能检测30个样品。
3. 称取约10g（±0.3g）组织样品。将称好的组织样品放在干净均质袋中。
4. 向称好的组织中加入30ml稀释后的“缓冲液1”（相当于终浓度稀释了4倍）。
5. 将均质袋放入均质器中，用最大速度连续均质2分钟。
6. 使用一次性吸头吸取1ml均质液置于离心管中。
7. 转速为5000g，离心1分钟，使上清液与固相分离。
8. 吸取1ml上清液检测分析。（相当于终浓度稀释了4倍）
9. 按照插条分析步骤进行接下来的操作。
样品前处理步骤（加工过的组织包括煮熟的肉类适用）
1. 从冰箱中取出试剂盒，恢复至室温。
2. 将“组织缓冲液”稀释20倍。可以取50ml“组织缓冲液”，加蒸馏水定容至1L。1L“缓冲液1”至少能检测30个样品。
3. 称取约10 g（±0.3g）组织样品。将称好的组织样品放在干净均质袋中。
4. 向称好的组织中加入30 ml稀释后的“缓冲液1”（相当于终浓度稀释了4倍）。
5. 再将均质袋放入均质器中，用最大速度连续均质2分钟。
6. 使用一次性吸头吸取1ml均质液置于离心管中。
7. 转速为5000g，离心1分钟，使上清液与固相分离。
8. 吸取400μl上清液置于离心管中，加入200μl“缓冲液2”（=终体积稀释了6倍）.
9. 按照插条分析步骤进行接下来的操作。
海产品：需使用去壳后干净的组织部分（*注意海产品的电导率）。
鸡蛋：推荐使用KIT013。
生鲜组织：若要求检测符合MRL（最大残留限量）标准的，推荐使用KIT013。
*请根据待测样品类型选择最佳的前处理步骤，如果前处理后的样品稀释液电导率大于10mS/cm，则不推荐使用Tetrasensor试剂盒进行检测。对于高盐分含量的特殊样品而言，如果前处理后的稀释液电导率大于10mS/cm，可再进行一次样品稀释（按照样品前处理步骤稀释溶液）使电导率≤10 mS/cm。注意，额外的稀释倍数将影响本产品的检出限量（表1）。比如一份尿样，10倍稀释后，四环素检测灵敏度约为50μg/kg(50ppb)，如果再稀释2倍，则四环素的检测灵敏度约为100μg/kg(100ppb) 。
插条分析步骤：
1. 取出所需数量试剂微孔放在白色的微孔托盘上，使用前开启塑料塞子。
2. 取出测试条然后盖好筒盖，在测试条的上部标记样品编号。
3. 从离心管中吸取200μl上清加入到装有冻干试剂的微孔中。
4. 反复抽吸（约15-20S），混合均匀。
5. 当试剂充分溶解后，立即将测试条插入试剂微孔中（箭头向下），并使测试条底部浸没，在室温下反应10分钟（±3分钟）。
6. 反应完成后，取出测试条，去掉下端的吸水海绵，立即进行结果判读。
结果判读（目测法）：
1. 首先目测控制线，如果控制线不出现，说明试剂失效或没有完全反应。
2. 在控制线正常显色的情况下，按照以下标准判断结果：
3. 对比测试条下方检测线（TEST）与上方控制线(CTRL)的颜色强度判断结果，具体标准如下（见图1）：
a. 若检测线的颜色比控制线的颜色深，则结果判读为阴性（-）。即样品中不含四环素残留或含有低于检测限量浓度含量的四环素（见表1）。
b. 若检测线的颜色比控制线的颜色一致或更浅，则结果判读为阳性（+），即样品中残留等于或高于检测限量浓度含量的四环素。
4. 遇到可疑阳性时，可15分钟内再次观察确认。
5. 记录下每个测试条的检测结果。
6. 测试条可以作为永久记录保存。注：测试条干燥后显色条带的颜色深度会增加。
